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TRAIL-Konzentrationen und Charakterisierung von TRAIL-exprimierenden Zellen im Nabelschnurblut ; TRAIL-concentration and characterisation of TRAIL-exprimating cells in umbilical chord blood
Ziel dieser Arbeit war es, die Rolle von tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) im Nabelschnurblut (NSB) zu charakterisieren, und TRAIL-exprimierende Zellen im NSB zu identifizieren. Dazu wurden von 45 NSB-Proben Vollblutstimulationen angesetzt, die jeweils aus einem unstimulierten (neg) und einem mit PHA (25 µg/ml) stimulierten Ansatz bestanden. Die Überstände wurden nach 48h abgezogen. Eosinophile wurden aus 9 Blutproben Erwachsener (Erw) und 5 NSB-Proben mittels Dichtezentrifugation und anschließender Säulenseparation mit magnetischen Antikörpern isoliert. Es wurden Stimulationsansätze angefertigt. Zusätzlich wurden die Eosinophilen lysiert. Die 14 Proben der isolierten Eosinophilen wurden mit dem FACS auf ihre Expression von TRAIL analysiert. Die Zytokin-Konzentrationen aller gewonnenen Überstände und der Lysate wurden mittels ELISA quantifiziert. In den Vollblutstimulationen fanden sich Mittelwerte der Zytokinkonzentrationen von 11,6 pg/ml (neg) und 26,2 pg/ml (PHA) für TRAIL, 0,51 pg/ml (neg) und 740 pg/ml (PHA) für IL-13 und 1,43 pg/ml (neg) und 1226 pg/ml (PHA) für IFNγ. Bei jedem der drei Zytokine unterschieden sich der neg- und der PHA-Mittelwert signifikant. Bei keinem der drei Zytokine fand sich ein signifikanter Unterschied der Mittelwerte bei Kindern mit familiärer atopischer Belastung im Vergleich zu unbelasteten Kindern. Lediglich für IL-13 fand sich eine Tendenz zu höheren Mittelwerten bei Kindern mit atopischer Belastung. Alle drei Zytokine korrelierten nach PHA-Stimulation signifikant positiv miteinander. Die CBMCs ließen sich durch murines TRAIL nicht zur Expression von IL-13 oder IFNγ stimulieren. In den Stimulationsansätzen der Eosinophilen fanden sich Mittelwerte der TRAIL-Konzentrationen in den Überständen von 9,38 pg/ml (neg-Erw), 6,79 pg/ml (neg-NSB), und 10,09 pg/ml (PHA-Erw), 8,44 pg/ml (PHA-NSB). In den Lysaten waren die Mittelwerte der TRAIL-Konzentrationen mit Werten von 153,37 pg/ml (neg-Erw), 52,50 pg/ml (neg-NSB) und 113,91 pg/ml (PHA-Erw), 99,31 pg/ml (PHA-NSB) wesentlich höher. Bei den Erw fanden sich hier höhere TRAIL-Werte für nicht-Atopiker als für Atopiker. Für IL-13 fanden sich Mittelwerte der Konzentrationen in den Überständen von 0,42 pg/ml (neg-Erw), 0,44 pg/ml (neg-NSB) und 0,77 pg/ml (PHA-Erw), 1,17 pg/ml (PHA-NSB) und in den Lysaten von 5,66 pg/ml (neg-Erw), 2,46 pg/ml (neg-NSB) und 6,92 pg/ml (PHA-Erw), 8,37 pg/ml (PHA-NSB). Hier fanden sich bei den Erw höhere IL-13-Werte für Atopiker als für nicht-Atopiker. In den Lysaten der PHA-Ansätze fand sich sowohl für die Erw als auch im NSB eine signifikant positive Korrelation von TRAIL und IL-13. Bei allen im FACS analysierten Proben der Eosinophilen ließen sich von der Hintergrundfluoreszenz signifikant abgrenzbare Werte TRAIL-spezifischer Fluoreszenz messen. Die Differenz zwischen Hintergrund und TRAIL-Färbung wurde in Fluoreszenzeinheiten (FE) angegeben und hatte einen Mittelwert bei den Erw von 48,46 FE und im NSB von 36,45 FE. In beiden Gruppen gab es eine große Streubreite der TRAIL-spezifischen Fluoreszenz, die bei den Erw gut mit der Aktivität einer atopischen Erkrankung korrelierte. Die NSB-Population war bei den Versuchen mit Eosinophilen mit nur 5 Proben zu klein um Aussagen über den Einfluss der familiären atopischen Belastung zu machen. Zusammenfassend konnten wir zeigen, dass: 1.TRAIL in Vollblutstimulationen nachweisbar ist und sich durch PHA stimulieren lässt. Die TRAIL-Konzentrationen unterscheiden sich nicht zwischen Neonaten mit und ohne familiärer atopischer Belastung. 2. TRAIL in den Vollblutstimulationsansätzen aus NSB sowohl mit IL-13 als auch mit IFNγ positiv korreliert. 3. TRAIL in den Überständen der Eosinophilen-Stimulationsansätze nachweisbar ist. 4. TRAIL in den Lysaten der Eosinophilen in deutlich höheren Konzentrationen als in den Stimulationsansätzen vorkommt. 5. TRAIL in den Lysaten der PHA-stimulierten Eosinophilen sehr gut mit IL-13 korreliert. 6. TRAIL auf der Oberfläche der Eosinophilen exprimiert wird und bei den Erw gut mit der Aktivität einer atopischen Erkrankung korreliert. ; The intention of this study was to characterise the role of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in umbilical chord blood (UCB), and to identify TRAIL-expressing cells in UCB. Methods: 45 UCB samples were analyzed performing full-blood stimulation-experiments. Each sample was divided and one part was stimulated with phytohaemagglutinin (PHA; 25 µg/ml), the other part was cultured unstimulated (neg). Supernatants were taken after 48 hours (h). Eosinophils were isolated from 9 samples of adults and 5 UCB samples on a separation medium density gradient and subsequently via magnetic cell sorting. Eosinophils were either stimulated with PHA or lysated. The TRAIL-expression of the 14 samples of eosinophils was analysed using fluorescence-activated cell sorter (FACS). All cytokine-concentrations in supernatants and lysates were quantified by means of ELISA. Results: The full-blood stimulations showed average cytokine-concentration values of 11,6 pg/ml (neg) and 26,2 pg/ml (PHA) for TRAIL, 0,51 pg/ml (neg) and 740 pg/ml (PHA) for IL-13 and 1,43 pg/ml (neg) and 1226 pg/ml (PHA) for IFNγ. Within each of the three cytokines the average value of unstimulated and PHA-stimulated experiments were significantly different. None of the three cytokines showed a significant difference between infants with atopic diseases in family history and infants without. Merely IL-13 showed a tendency to higher average values for infants with atopic diseases in family history. All three cytokines had a significant positive correlation with each other after PHA-stimulation. The chord-blood mononuclear cells (CBMC) could not be stimulated to express TRAIL by using IL-13 or IFNγ as a stimulant. Moreover, we observed average TRAIL-concentration values in the supernatants of the stimulation-experiments with eosinophils of 9,38 pg/ml (neg-adults), 6,79 pg/ml (neg-UCB), and 10,09 pg/ml (PHA-adults), 8,44 pg/ml (PHA-UCB). In the lysates the average TRAIL-concentrations were higher with values of 153,37 pg/ml (neg-adults), 52,50 pg/ml (neg-UCB) and 113,91 pg/ml (PHA-adults), 99,31 pg/ml (PHA-UCB). Higher TRAIL-concentrations for non-atopic adults compared to atopics were found. The average IL-13 concentration values in the supernatants were 0,42 pg/ml (neg-adults), 0,44 pg/ml (neg-UCB) and 0,77 pg/ml (PHA-adults), 1,17 pg/ml (PHA-UCB) and in lysates 5,66 pg/ml (neg-adults), 2,46 pg/ml (neg-UCB) and 6,92 pg/ml (PHA-adults), 8,37 pg/ml (PHA-UCB). We found higher IL-13-concentrations for atopic adults compared to non-atopics. The lysates of the PHA-stimulated eosinophils pointed out significantly positive correlations between TRAIL and IL-13 for adults and UCB-samples. Compared to the background fluorescence we could measure significant amounts of TRAIL-specific fluorescence in the FACS analysis of the eosinophils. The difference between the background and the TRAIL-fluorescence was measured in fluorescence units (FU) and had an average value of 48,46 FE (adults) and of 36,45 FE (UCB). There was a large dispersion of the TRAIL-specific fluorescence in both groups, which had a good correlation with the activity of an atopic disease within the group of adults. The UCB-population of the experiments with eosinophils was too small to make valuable statements about the influence of atopic diseases in family history. Summary: We could show that: 1. TRAIL is expressed in the full-blood stimulations and can further be stimulated by PHA. There is no difference between the infants with atopic diseases in family history compared to those without. 2. In the full-blood stimulations TRAIL is positively correlated with IL-13 and with IFNγ. 3. TRAIL is detectable in the supernatants of the eosinophil-stimulations. 4. There are clearly higher concentrations of TRAIL in the lysates of the eosinophils compared to the supernatants of the stimulation-experiments. 5. TRAIL correlates in the lysates of the PHA-stimulated eosinophils highly with IL-13. 6. TRAIL is exprimated on the surface of eosinophils and correlates with the activity of an atopic disease among adults.
TRAIL-Konzentrationen und Charakterisierung von TRAIL-exprimierenden Zellen im Nabelschnurblut ; TRAIL-concentration and characterisation of TRAIL-exprimating cells in umbilical chord blood
Ziel dieser Arbeit war es, die Rolle von tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) im Nabelschnurblut (NSB) zu charakterisieren, und TRAIL-exprimierende Zellen im NSB zu identifizieren. Dazu wurden von 45 NSB-Proben Vollblutstimulationen angesetzt, die jeweils aus einem unstimulierten (neg) und einem mit PHA (25 µg/ml) stimulierten Ansatz bestanden. Die Überstände wurden nach 48h abgezogen. Eosinophile wurden aus 9 Blutproben Erwachsener (Erw) und 5 NSB-Proben mittels Dichtezentrifugation und anschließender Säulenseparation mit magnetischen Antikörpern isoliert. Es wurden Stimulationsansätze angefertigt. Zusätzlich wurden die Eosinophilen lysiert. Die 14 Proben der isolierten Eosinophilen wurden mit dem FACS auf ihre Expression von TRAIL analysiert. Die Zytokin-Konzentrationen aller gewonnenen Überstände und der Lysate wurden mittels ELISA quantifiziert. In den Vollblutstimulationen fanden sich Mittelwerte der Zytokinkonzentrationen von 11,6 pg/ml (neg) und 26,2 pg/ml (PHA) für TRAIL, 0,51 pg/ml (neg) und 740 pg/ml (PHA) für IL-13 und 1,43 pg/ml (neg) und 1226 pg/ml (PHA) für IFNγ. Bei jedem der drei Zytokine unterschieden sich der neg- und der PHA-Mittelwert signifikant. Bei keinem der drei Zytokine fand sich ein signifikanter Unterschied der Mittelwerte bei Kindern mit familiärer atopischer Belastung im Vergleich zu unbelasteten Kindern. Lediglich für IL-13 fand sich eine Tendenz zu höheren Mittelwerten bei Kindern mit atopischer Belastung. Alle drei Zytokine korrelierten nach PHA-Stimulation signifikant positiv miteinander. Die CBMCs ließen sich durch murines TRAIL nicht zur Expression von IL-13 oder IFNγ stimulieren. In den Stimulationsansätzen der Eosinophilen fanden sich Mittelwerte der TRAIL-Konzentrationen in den Überständen von 9,38 pg/ml (neg-Erw), 6,79 pg/ml (neg-NSB), und 10,09 pg/ml (PHA-Erw), 8,44 pg/ml (PHA-NSB). In den Lysaten waren die Mittelwerte der TRAIL-Konzentrationen mit Werten von 153,37 pg/ml (neg-Erw), 52,50 pg/ml (neg-NSB) und 113,91 pg/ml (PHA-Erw), 99,31 pg/ml (PHA-NSB) wesentlich höher. Bei den Erw fanden sich hier höhere TRAIL-Werte für nicht-Atopiker als für Atopiker. Für IL-13 fanden sich Mittelwerte der Konzentrationen in den Überständen von 0,42 pg/ml (neg-Erw), 0,44 pg/ml (neg-NSB) und 0,77 pg/ml (PHA-Erw), 1,17 pg/ml (PHA-NSB) und in den Lysaten von 5,66 pg/ml (neg-Erw), 2,46 pg/ml (neg-NSB) und 6,92 pg/ml (PHA-Erw), 8,37 pg/ml (PHA-NSB). Hier fanden sich bei den Erw höhere IL-13-Werte für Atopiker als für nicht-Atopiker. In den Lysaten der PHA-Ansätze fand sich sowohl für die Erw als auch im NSB eine signifikant positive Korrelation von TRAIL und IL-13. Bei allen im FACS analysierten Proben der Eosinophilen ließen sich von der Hintergrundfluoreszenz signifikant abgrenzbare Werte TRAIL-spezifischer Fluoreszenz messen. Die Differenz zwischen Hintergrund und TRAIL-Färbung wurde in Fluoreszenzeinheiten (FE) angegeben und hatte einen Mittelwert bei den Erw von 48,46 FE und im NSB von 36,45 FE. In beiden Gruppen gab es eine große Streubreite der TRAIL-spezifischen Fluoreszenz, die bei den Erw gut mit der Aktivität einer atopischen Erkrankung korrelierte. Die NSB-Population war bei den Versuchen mit Eosinophilen mit nur 5 Proben zu klein um Aussagen über den Einfluss der familiären atopischen Belastung zu machen. Zusammenfassend konnten wir zeigen, dass: 1.TRAIL in Vollblutstimulationen nachweisbar ist und sich durch PHA stimulieren lässt. Die TRAIL-Konzentrationen unterscheiden sich nicht zwischen Neonaten mit und ohne familiärer atopischer Belastung. 2. TRAIL in den Vollblutstimulationsansätzen aus NSB sowohl mit IL-13 als auch mit IFNγ positiv korreliert. 3. TRAIL in den Überständen der Eosinophilen-Stimulationsansätze nachweisbar ist. 4. TRAIL in den Lysaten der Eosinophilen in deutlich höheren Konzentrationen als in den Stimulationsansätzen vorkommt. 5. TRAIL in den Lysaten der PHA-stimulierten Eosinophilen sehr gut mit IL-13 korreliert. 6. TRAIL auf der Oberfläche der Eosinophilen exprimiert wird und bei den Erw gut mit der Aktivität einer atopischen Erkrankung korreliert. ; The intention of this study was to characterise the role of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in umbilical chord blood (UCB), and to identify TRAIL-expressing cells in UCB. Methods: 45 UCB samples were analyzed performing full-blood stimulation-experiments. Each sample was divided and one part was stimulated with phytohaemagglutinin (PHA; 25 µg/ml), the other part was cultured unstimulated (neg). Supernatants were taken after 48 hours (h). Eosinophils were isolated from 9 samples of adults and 5 UCB samples on a separation medium density gradient and subsequently via magnetic cell sorting. Eosinophils were either stimulated with PHA or lysated. The TRAIL-expression of the 14 samples of eosinophils was analysed using fluorescence-activated cell sorter (FACS). All cytokine-concentrations in supernatants and lysates were quantified by means of ELISA. Results: The full-blood stimulations showed average cytokine-concentration values of 11,6 pg/ml (neg) and 26,2 pg/ml (PHA) for TRAIL, 0,51 pg/ml (neg) and 740 pg/ml (PHA) for IL-13 and 1,43 pg/ml (neg) and 1226 pg/ml (PHA) for IFNγ. Within each of the three cytokines the average value of unstimulated and PHA-stimulated experiments were significantly different. None of the three cytokines showed a significant difference between infants with atopic diseases in family history and infants without. Merely IL-13 showed a tendency to higher average values for infants with atopic diseases in family history. All three cytokines had a significant positive correlation with each other after PHA-stimulation. The chord-blood mononuclear cells (CBMC) could not be stimulated to express TRAIL by using IL-13 or IFNγ as a stimulant. Moreover, we observed average TRAIL-concentration values in the supernatants of the stimulation-experiments with eosinophils of 9,38 pg/ml (neg-adults), 6,79 pg/ml (neg-UCB), and 10,09 pg/ml (PHA-adults), 8,44 pg/ml (PHA-UCB). In the lysates the average TRAIL-concentrations were higher with values of 153,37 pg/ml (neg-adults), 52,50 pg/ml (neg-UCB) and 113,91 pg/ml (PHA-adults), 99,31 pg/ml (PHA-UCB). Higher TRAIL-concentrations for non-atopic adults compared to atopics were found. The average IL-13 concentration values in the supernatants were 0,42 pg/ml (neg-adults), 0,44 pg/ml (neg-UCB) and 0,77 pg/ml (PHA-adults), 1,17 pg/ml (PHA-UCB) and in lysates 5,66 pg/ml (neg-adults), 2,46 pg/ml (neg-UCB) and 6,92 pg/ml (PHA-adults), 8,37 pg/ml (PHA-UCB). We found higher IL-13-concentrations for atopic adults compared to non-atopics. The lysates of the PHA-stimulated eosinophils pointed out significantly positive correlations between TRAIL and IL-13 for adults and UCB-samples. Compared to the background fluorescence we could measure significant amounts of TRAIL-specific fluorescence in the FACS analysis of the eosinophils. The difference between the background and the TRAIL-fluorescence was measured in fluorescence units (FU) and had an average value of 48,46 FE (adults) and of 36,45 FE (UCB). There was a large dispersion of the TRAIL-specific fluorescence in both groups, which had a good correlation with the activity of an atopic disease within the group of adults. The UCB-population of the experiments with eosinophils was too small to make valuable statements about the influence of atopic diseases in family history. Summary: We could show that: 1. TRAIL is expressed in the full-blood stimulations and can further be stimulated by PHA. There is no difference between the infants with atopic diseases in family history compared to those without. 2. In the full-blood stimulations TRAIL is positively correlated with IL-13 and with IFNγ. 3. TRAIL is detectable in the supernatants of the eosinophil-stimulations. 4. There are clearly higher concentrations of TRAIL in the lysates of the eosinophils compared to the supernatants of the stimulation-experiments. 5. TRAIL correlates in the lysates of the PHA-stimulated eosinophils highly with IL-13. 6. TRAIL is exprimated on the surface of eosinophils and correlates with the activity of an atopic disease among adults.
TRAIL-Konzentrationen und Charakterisierung von TRAIL-exprimierenden Zellen im Nabelschnurblut ; TRAIL-concentration and characterisation of TRAIL-exprimating cells in umbilical chord blood
Bosch, Stefan (author)
2007-01-01
Theses
Electronic Resource
German
The Trail of Tears National Historic Trail
Online Contents | 1996
|British Library Online Contents | 2005
Engineering Index Backfile | 1896
|TRAIL-R1 and TRAIL-R2 Mediate TRAIL-Dependent Apoptosis in Activated Primary Human B Lymphocytes.
BASE | 2019
|Online Contents | 2012
|