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In-Vitro-Rekonstitution der Deadenylierung und Translationsrepression der nanos-mRNA aus D. melanogaster
Die post-transkriptionelle Regulation maternaler mRNAs ist essenziell für die frühe Embryonalentwicklung. So ist die Translationsrepression der nanos-mRNA ent-scheidend für die Ausbildung der anterior-posterior-Achse der Drosophila-Embryonen. Die Repression wird durch Bindung vom Protein Smaug an smaug recognition elements (SREs) in der 3‘-UTR der nanos-mRNA vermittelt, worüber wei-tere Proteine, u.a. der Deadenylasekomplex CCR4-NOT, rekrutiert werden. In dieser Arbeit wurde erstmalig der Drosophila-CCR4-NOT-Komplex und die Smaug-abhängige Deadenylierung in vitro rekonstituiert. Smaug allein ist dabei ausrei-chend, um den CCR4-NOT-Komplex zu rekrutieren und führt dadurch zur Deadeny-lierung von SRE-haltigen RNAs. CCR4-NOT allein verhält sich distributiv, wohin-gegen durch Smaug prozessives Verhalten induziert wird. Außerdem wurde mit zell-freien Translationssystem beobachtet, dass Smaug und Cup für die zeitabhängige und stabile Ausbildung des Translationsrepressorkomplexes notwendig sind. ; Posttranscriptional regulation of maternal mRNAs is essential for early embryonic development. For instance, translational repression of nanos mRNA is critical for the formation of the anterior-posterior axis of the Drosophila embryo. Repression is me-diated through binding of the protein Smaug to smaug recognition elements (SREs) in the 3’ UTR of nanos mRNA. Thereby, additional proteins like the CCR4-NOT deadenylase complex are recruited to the mRNA. Here I report first-time in vitro re-constitution of the Drosophila CCR4-NOT complex and Smaug-dependent dead-enylation. Smaug by itself suffices to cause SRE-specific deadenylation by recruit-ing the CCR4-NOT complex. The CCR4-NOT complex on its own is distributive, whereas in association with Smaug the complex exhibits processive behaviour. Fur-thermore, a cell-free translation system enabled the observation that Smaug and Cup are necessary for the time-dependent and stable formation of the translation repression complex.
In-Vitro-Rekonstitution der Deadenylierung und Translationsrepression der nanos-mRNA aus D. melanogaster
Die post-transkriptionelle Regulation maternaler mRNAs ist essenziell für die frühe Embryonalentwicklung. So ist die Translationsrepression der nanos-mRNA ent-scheidend für die Ausbildung der anterior-posterior-Achse der Drosophila-Embryonen. Die Repression wird durch Bindung vom Protein Smaug an smaug recognition elements (SREs) in der 3‘-UTR der nanos-mRNA vermittelt, worüber wei-tere Proteine, u.a. der Deadenylasekomplex CCR4-NOT, rekrutiert werden. In dieser Arbeit wurde erstmalig der Drosophila-CCR4-NOT-Komplex und die Smaug-abhängige Deadenylierung in vitro rekonstituiert. Smaug allein ist dabei ausrei-chend, um den CCR4-NOT-Komplex zu rekrutieren und führt dadurch zur Deadeny-lierung von SRE-haltigen RNAs. CCR4-NOT allein verhält sich distributiv, wohin-gegen durch Smaug prozessives Verhalten induziert wird. Außerdem wurde mit zell-freien Translationssystem beobachtet, dass Smaug und Cup für die zeitabhängige und stabile Ausbildung des Translationsrepressorkomplexes notwendig sind. ; Posttranscriptional regulation of maternal mRNAs is essential for early embryonic development. For instance, translational repression of nanos mRNA is critical for the formation of the anterior-posterior axis of the Drosophila embryo. Repression is me-diated through binding of the protein Smaug to smaug recognition elements (SREs) in the 3’ UTR of nanos mRNA. Thereby, additional proteins like the CCR4-NOT deadenylase complex are recruited to the mRNA. Here I report first-time in vitro re-constitution of the Drosophila CCR4-NOT complex and Smaug-dependent dead-enylation. Smaug by itself suffices to cause SRE-specific deadenylation by recruit-ing the CCR4-NOT complex. The CCR4-NOT complex on its own is distributive, whereas in association with Smaug the complex exhibits processive behaviour. Fur-thermore, a cell-free translation system enabled the observation that Smaug and Cup are necessary for the time-dependent and stable formation of the translation repression complex.
In-Vitro-Rekonstitution der Deadenylierung und Translationsrepression der nanos-mRNA aus D. melanogaster
Pekovic, Filip (author) / Wahle, Elmar / Hüttelmaier, Stefan / Fischer, Utz
2022-01-01
Theses
Electronic Resource
German
Mittelfristige klinische und radiologische Ergebnisse der Nanos®-Kurzschaftendoprothese
| BASE | 2020